Primjena boce seruma
Boca seruma je napravljena od nisko ekstrakcionog borozilikatnog stakla, a bezbojna bistra boca zadovoljava zahtjeve USP Type I i ASTM E 438 Type I Standard Class A. Može biti autoklaviran na 121°C za 20min, i može se podijeliti na 125ml, 250ml, 500ml, 1L, 2L prema volumenu.
Boca seruma je kontejner za skladištenje seruma, koji je generalno napravljen od PET materijala injekcijom proces rastezanja duvanja. Medij je hranjiva materija potrebna za rast ćelija. Prema svom izvoru, podijeljen je na sintetički medij i prirodni medij, od kojih se obje mogu pohraniti u serumske boce.
Boca seruma
Prirodni medij:
Najčešće korišteni prirodni medij je serum, u osnovi telećeg seruma. Serum sadrži razne faktore rasta ćelija, faktore koji promovišu adheziju i njihove multiaktivne supstance. U kombinaciji sa sintetičkim medijumom, ćelije se mogu proliferirati i glatko rasti. Serum treba čuvati u posebnim bocama seruma na -5°C do -20°C.
Sintetički medij:
Sintetički medij je strogo formuliran prema vrsti i količini supstanci koje zahtijevaju ćelije. Postoji mnogo tipova i poznatih komponenti, što olakšava kontrolu eksperimentalnih uslova. Sadrži ugljikohidrate, aminokiseline, lipide, anorganske soli, vitamine, elemente u tragovima i faktore rasta ćelija. Međutim, u odnosu na prirodni medij, neke prirodne nepoznate komponente ne mogu se zamijeniti poznatim hemijskim komponentama. Stoga osnovni sintetički medij koji se koristi u kulturi ćelija također mora dodati određenu količinu prirodnih srednje komponenti kako bi se prevazišla sintetička kultura. Nedovoljna baza, najčešća praksa je dodavanje telećeg seruma.
Oblik serumske boce je kvadratan, lak za dohvaćanje, otporan na većinu kiselih i alkalističkih korozija, temperatura embritlacije je -70 °C, a još uvijek ima određenu tvrdoću na -30 °C. To je dobar spremnik za pakiranje, bilo da je to prirodna srednja ili sintetička kultura. može se čuvati u bocama seruma.
Za izolaciju, kulturu i identifikaciju endotelijske progenitorske ćelije ljudske pupčane vrpce i uspostavljanje aceularnih vaskularnih skela poboljšanom metodom zamrzavanja
Da bi se istražila izvodljivosti i klinička primjena vrijednosti endotela progenitornih ćelija izoliranih i kulturanih iz krvi ljudske pupčane vrpce.
Metode: Krv iz pupčane vrpce fetusa koji su podvrgnuti celorožnom rezu cezara u Odjelu za akušeriju i ginekologiju, prikupljena je Prva povezana bolnica Medicinskog koledža Bengbu, koja se nalazi u serumskoj boci koja sadrži 50U/ml heparina pod aseptičkim uslovima, uskladištena u ledenoj kutiji od 4°C, i transportovana u ćelije u prostoriji kulture, mononuklearni ćelije krvi pupčane vrpce dobivene su centrifugacijom gradijenta densiteta. Dobivene mononuklearane ćelije su podijeljene u dva dijela, a dodani su i fetalni teleći serum M199 medij (FCS-M199) i autologni serum M199 medij (AS-M199). I oni su bili zasjenjeni u kulturnim jelima sa i bez ljudskog fibronektina (HFN) (označeno kao: F(0), F(1), A(0), A(1)) odnosno. Izvedena je in vitro indukcija, differentiacija i ekspanzija.
Uočene su morfološke promjene adherentnih ćelija tokom cijelog procesa indukcije i deferencijacije, te su identificirane iz različitih uglova u kombinaciji sa srodnim tehnikama kao što su imunohistohemija, imunofluorescence i protočna cistometrija.
Rezultati: Nakon 12 dana kulture, mononuklearne ćelije krvi vrpce su se počele pridržavati. Nakon 3d, oblik kralježnice se počeo pojavljivati, a onda se broj prianjajuæih ćelija postepeno povećavao i postepeno je postajao u obliku kralježnice. Kada je kulturana do jedne sedmice, tipična kolonija se formirala sa ćelijama kičme oko i okruglih ćelija u centru. Kada su ćelije bile kulturane 14 dana, međusobno povezani klasteri ćelija su se postepeno povezali i formirali strukturu naliku mreži. U isto vrijeme, uz kontinuirano povećanje vremena kulture, duge ćelije kralježnice također su se počele postepeno skratiti, i pokazale su tipičnu promjenu popločavanja kamena.
Adherentne ćelije su bile kulturane jednu sedmicu i primjećivano je da je broj ćelija u mediju sa ljudskim fibronektinom znatno veći od onog bez ljudskog fibronektina, te da nije bilo značajne promjene broja ćelija u dva različita medija.