PCR detekcija
Lančana reakcija polimeraze (PCR) koristi komad DNK kao šablon, a uz učešće DNK polimeraze i nukleotidnog supstrata, DNK se umnožava do količine dovoljne za strukturnu i funkcionalnu analizu. Metoda PCR detekcije ima izuzetno važan značaj u kliničkoj brzoj dijagnostici bakterijskih zaraznih bolesti.
Princip PCR-a se koristi za amplifikaciju fragmenta DNK koji se nalazi između dvije poznate sekvence, slično procesu replikacije prirodne DNK. Molekul DNK koji se amplificira koristi se kao šablon, a par oligonukleotidnih fragmenata komplementarnih 5'kraju i 3'kraju šablona se koristi kao prajmer. Pod dejstvom DNK polimeraze, on prati šablon prema polurezerviranom mehanizmu replikacije. Produženje lanca do završetka nove sinteze DNK, ponovite ovaj proces, ciljni DNK fragment se može pojačati.
(PCR) je metoda za enzimsku sintezu specifičnih fragmenata DNK in vitro. Sastoji se od nekoliko koraka visokotemperaturne denaturacije, niskotemperaturnog žarenja i odgovarajuće temperaturne ekstenzije. Karakteristike kao što su visoka osjetljivost, jednostavan rad i ušteda vremena. Može se koristiti ne samo u osnovnim istraživanjima kao što su izolacija gena, kloniranje i analiza sekvenci nukleinskih kiselina, već i u dijagnostici bolesti ili bilo kojeg mjesta gdje postoje DNK i RNK. Lančana reakcija polimeraze (Polymerase Chain Reaction, skraćeno PCR) je također poznata kao molekularno kloniranje bez ćelija ili specifična DNK sekvenca in vitro enzimske tehnologije amplifikacije usmjerene na prajmer.
Polu-rezervirana replikacija DNK važan je način za biološku evoluciju i prolazak. Dvolančana DNK se može denaturirati i rastopiti u jednu lancu pod djelovanjem raznih enzima. Uz učešće DNK polimeraze i promotora, dvolančana DNK se može replicirati u ista dva molekula po principu komplementarnog uparivanja baza. U eksperimentima je utvrđeno da se DNK može denaturirati i rastopiti na visokim temperaturama, a može se ponovo renaturirati u dvostruke niti kada se temperatura snizi. Stoga, kontroliranjem denaturacije i renaturacije DNK kroz promjene temperature i dizajniranjem prajmera kao promotora, dodavanjem DNK polimeraze i dNTP-a može se završiti in vitro replikacija specifičnih gena.
Jednostavna stvar je da koristite specijalnu opremu, koristite dNTPS, Mg2+, specifične prajmere, DNK polimerazu i sistem pufera, dodate šablon, koji je uzorak DNK za in vitro amplifikaciju, i izvršite elektroforezu. Ako se može pojačati, a veličina pojačanog proizvoda je u skladu s ciljnom trakom, to znači da su prajmer i šablon specifični, a indeks detekcije pozitivan.
Metode i koraci PCR detekcije nukleinske kiseline
Testiranje nukleinske kiseline zahtijeva pet koraka: uzorkovanje, zadržavanje uzorka, zadržavanje, ekstrakcija nukleinske kiseline i kompjutersko testiranje.
Detekcija nukleinske kiseline
Prvi korak je sakupljanje ljudskog sekreta i brisanje nosne šupljine ili stražnje stijenke ždrijela i obostranih faringealnih krajnika nazalnim testom ili testom ždrijela.
U drugom koraku, medicinsko osoblje je zadržalo uzorak, potopilo glavu testa u rastvor za konzervaciju ćelija i zašrafilo poklopac epruvete odmah nakon lomljenja repa.
U trećem dijelu uzorak staviti u hermetičku vrećicu, čuvati i na vrijeme poslati na pregled.
Četvrti korak je slanje uzorka u laboratoriju za ekstrakciju nukleinske kiseline.
U petom koraku, ekstrakt se podvrgava reakciji fluorescentne PCR amplifikacije.
Također je potreban neki potrošni materijal i instrumenti
PCR instrument, PCR epruveta, vrh pipete, ploča za duboku jažicu, rezervoar i reagensi dodani
