PCR tehnologija je slična prirodnom procesu replikacije DNK, a njena specifičnost se oslanja na oligonukleotidne prajmere komplementarne oba kraja ciljne sekvence. PCR se sastoji od tri osnovna koraka reakcije: denaturacija, žarenje i ekstenzija. Ovaj proces reakcije se izvodi u PCR reakcijskom kontejneru. Uz kontinuirani razvoj instrumenta za amplifikaciju gena, reakcioni kontejner je također doživio postepeni razvoj centrifugalne cijevi od 1,5ml do 0.2ml (0.25ml) do tankog zida {{ 7}}.2 ml namijenjeno za PCR. , 0.1 mlpcr epruveta. Sa povećanjem broja reakcija PCR amplifikacije, postepeno se formiraju kontejneri za amplifikaciju gena visoke propusnosti za PCR trake i PCR ploče.
PCR se sastoji od tri osnovna koraka reakcije: denaturacija-žarenje-ekstenzija
Denaturacija šablonske DNK:
Nakon što se DNK šablona zagreje na oko 94 stepena tokom određenog vremenskog perioda, dvolančana DNK šablonske DNK ili dvolančana DNK formirana PCR amplifikacijom se disocira, tako da se može kombinovati sa prajmerom za pripremu za sledeću rundu reakcije.
Žarenje (renaturacija) šablonske DNK prajmerima:
Nakon što se DNK matrice zagrijavanjem denaturira u jedan lanac, a temperatura se spusti na oko 55 stepeni, prajmeri se uparuju sa komplementarnom sekvencom jednog lanca DNK šablona.
Produžetak prajmera:
Pod djelovanjem Taq-a, konjugat DNK šablon-primer koristi dNTP kao sirovinu reakcije za sintetizaciju novog polu-rezerviranog lanca replikacije komplementarnog šablonskom DNK lancu prema principu uparivanja baza i polu-rezervirane replikacije.
Osnovni principi PCR tehnologije
Tehnologija se oslanja na reakciju enzimske sinteze DNK polimeraze u prisustvu šablonske DNK, prajmera i četiri deoksiribonukleotida.
DNK polimeraza koristi jednolančanu DNK kao šablon za iniciranje sinteze s malim komadom dvolančane DNK. Jedan ili dva sintetička oligonukleotidna prajmera se kombinuju sa komplementarnom sekvencom u jednolančanoj DNK šabloni da bi se formirala delimična dvolančana DNK.
Pod odgovarajućom temperaturom i okolinom, DNK polimeraza dodaje deoksimononukleotid na 3´-OH kraj prajmera i koristi ga kao početnu tačku za širenje duž 5´→3´ smjera šablona kako bi se sintetizirao novi komplementarni lanac DNK.
Razlika između PCR epruveta i centrifugalnih epruveta
PCR epruvete:
PCR reakciona ploča je 96-jažica ili 384-jažica, koja je posebno dizajnirana za serijske reakcije. Princip je da je propusnost PCR mašine i sekvencera generalno 96 ili 384.
Centrifužna cijev:
Centrifužna epruveta nije nužno PCR epruveta. Postoji mnogo vrsta centrifugalnih cijevi prema njihovom kapacitetu. Najčešće korištene su od 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ili 50 ml, a najmanja (250 ul) može se koristiti kao PCR epruveta.
Kako odabrati PCR epruvete
Odlučili smo da postavimo PCR epruvete u nadi da ćemo izabrati najtačniju lokaciju za temperaturu.
Najprecizniji položaj temperature trebao bi biti položaj iznad temperaturnog senzora ispod modula (bez obzira na netačnu temperaturu senzora).
Položaj temperaturnog senzora različitih PCR instrumenata je različit.
Na primjer, AB-ov 2720 ima samo jedan u sredini, MJ-ov 200 ima tri senzora, koji su donji lijevi, srednji i gornji desni, Eppendorfov bi trebao biti u redu A ili H, a Dongshenglong 811 ima tri senzora temperature, B{{3} } treba odabrati , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, jer su ove tačke temperaturne tačke.
