Osnovni zahtjevi za prikupljanje uzoraka
1. Uzorke hospitaliziranih slučajeva prikuplja medicinsko osoblje bolnice u kojoj se nalaze, a uzorke bliskih kontakata prikupljaju lokalna određena agencija za kontrolu bolesti i medicinska ustanova. Prilikom prikupljanja uzoraka, različita područja uzorkovanja treba postaviti prema različitim objektima prikupljanja. Pacijenti s groznicom idu u klinike za povišenu temperaturu radi liječenja i uzorkovanja. Ustanove koje nemaju klinike za groznicu trebale bi uspostaviti posebne prostore za uzorkovanje za pacijente s groznicom, te uzorkovati bolesnike s groznicom i druge grupe za testiranje kako bi se izbjegle raskrsnice. infekcija. 2. Asimptomatske inficirane osobe, ulazno osoblje i bliski kontakti trebaju uzeti bris nazofarinksa za testiranje nukleinske kiseline tokom izolacije i opservacije. Dva uzorka nazofaringealnog brisa treba uzeti u isto vrijeme kada se izolacija pusti, a za testiranje treba koristiti različite reagense za detekciju nukleinske kiseline. U principu, sekundarno testiranje provode različite institucije za testiranje. 3. U skladu sa potrebama kliničkog i laboratorijskog ispitivanja, tokom hospitalizacije i izolacije može se uzeti više uzoraka, a istovremeno se može uzeti više uzoraka kao što su respiratorni trakt, krv i stolica. Osoblje koje vrši uzorkovanje treba striktno slijediti specifikacije uzorkovanja za prikupljanje uzoraka kako bi osiguralo da kvalitet prikupljenih uzoraka ispunjava zahtjeve. Istovremeno, trebaju detaljno zabilježiti podatke o ispitaniku, a mogu koristiti skeniranje bar kodova i druge metode informisanja za prikupljanje relevantnih informacija. 4. Za skrining populacije, epruvete za uzorkovanje treba odrediti u skladu sa zahtjevima reagensa koji se koriste za ekstrakciju i detekciju nukleinske kiseline, a mogu se odabrati epruvete za uzorkovanje koje sadrže agense za inaktivaciju virusa (gvanidinske soli ili surfaktante, itd.). Uzorak koji se koristi za izolaciju virusa treba staviti u epruvetu za uzorkovanje koja ne sadrži agens za inaktivaciju virusa. 5. Predmeti i praćenje životne sredine treba da se zasnivaju na svrhe praćenja i prevencije i kontrole treba da se odrede predmeti uzorkovanja, lokacija i količina, uzorkovanje treba striktno da prati specifikacije uzorkovanja.
(4) Vrste prikupljenih uzoraka. Svaki slučaj mora prikupiti uzorke akutnog respiratornog trakta (uključujući uzorke gornjih ili donjih respiratornih puteva). U teškim slučajevima, prvo se uzimaju uzorci iz donjeg respiratornog trakta; uzorci stolice, uzorci pune krvi, uzorci seruma i fekalni uzorci mogu se uzeti u skladu s kliničkim potrebama. Uzorak urina. Artikli i uzorci životne sredine prikupljaju se u skladu sa zahtjevima praćenja.
Vrste uzoraka: 1. Uzorci gornjih disajnih puteva: uključujući briseve nazofarinksa, briseve grla, itd. 2. Uzorci donjeg respiratornog trakta: sputum dubokog kašlja, tekućina iz alveolarne lavaže, tekućina za ispiranje bronha, aspirat respiratornog trakta, itd. 3. Uzorci stolice/anal brisevi: treba sakupiti oko 10 grama (veličine kikirikija). Ako nije zgodno čuvati uzorke stolice, mogu se uzeti analni brisevi. 4. Uzorak krvi: krv antikoagulans, zapremina za prikupljanje je 5 ml, preporučuje se upotreba vakuumske krvne žile koja sadrži EDTA antikoagulans za prikupljanje krvi. 5. Uzorci seruma: pokušajte prikupiti dvostruke uzorke seruma tokom akutne faze i faze oporavka. Prvi serum treba uzeti što je prije moguće (najbolje u roku od 7 dana od početka bolesti), a drugi serum treba uzeti 3 do 4 sedmice od početka bolesti. Volumen sakupljanja je 5 ml, a preporučuje se korištenje vakuumske cijevi za vađenje krvi bez antikoagulansa. Uzorci seruma se uglavnom koriste za određivanje antitijela, a ne otkrivaju nukleinske kiseline. 6. Uzorak urina: sakupite urin sredinom jutra, zapremina sakupljanja je 2~3ml. 7. Površinski uzorci: uključujući uvezenu hranu hladnog lanca ili uvezenu robu na unutrašnjoj i vanjskoj površini pakovanja, kao i alate za transport i skladištenje i druge dijelove koji mogu biti kontaminirani prikupljanjem mrlja. 8. Uzorci kanalizacije: Prema distribuciji drenažnog sistema velikih uvezenih lokacija za preradu i tretman smrznute robe u morskoj luci, fokusirajte se na odabir ispusta za otpadnu vodu, sakupljanje unutrašnje cijevne mreže, nizvodno od toka kanalizacije ili vezu sa komunalnom cevovodnom mrežom itd. 2 do 3 tačke Uzorkovane su bitovi.
(4) Sakupljanje i obrada uzoraka
1. Bris nazofarinksa: uzorkivač jednom rukom nežno podupire glavu osobe koja se uzima, a drugom drži bris. Bris ulazi u nozdrvu i polako ide duboko po dnu donjeg nosnog prolaza. Pošto je nosni prolaz zakrivljen, to nije prihvatljivo. Pretjerana sila kako bi se izbjeglo traumatsko krvarenje. Kada vrh štapića dosegne stražnji zid nazofaringealne šupljine, lagano ga rotirajte tjedan dana (u slučaju refleksnog kašlja, ostanite neko vrijeme), zatim polako izvadite bris, a glavu brisa uronite u 2～3ml rastvor za konzervaciju virusa (može se koristiti i za upotrebu izotonične fiziološke otopine, tekućine za kulturu tkiva ili fosfatnog pufera), odbacite rep i čvrsto zavijte poklopac.
2. Bris ždrijela: osoba koja se uzima treba isprati usta normalnim fiziološkim rastvorom, a osoba koja uzima uzorke će navlažiti bris u sterilnom fiziološkom rastvoru (zabranjeno je stavljati bris u rastvor za konzervaciju virusa kako bi se izbeglo da antibiotici izazovu alergije), a osoba koja se sakuplja Nagnite malo glavu, otvorite usta i napravite"ah" zvuk, otkrivajući krajnike sa obe strane, stavite bris preko baze jezika, obrišite krajnike sa obe strane osobe sa malo snage najmanje 3 puta, a zatim obrišite gore-dole zadnji deo ždrela najmanje 3 puta. Zatim uronite glavu brisa u epruvetu koja sadrži 2 do 3 ml rastvora za konzervaciju virusa (može se koristiti i izotonični fiziološki rastvor, tečnost kulture tkiva ili rastvor fosfatnog pufera), odbacite rep i čvrsto zašrafite poklopac epruvete. Bris grla se takođe može staviti u istu epruvetu kao i nazofaringealni bris.
3. Ekstrakt nazofarinksa ili ekstrakt respiratornog trakta: Koristite kolektor povezan sa pumpom za negativni pritisak da biste izvukli sluz iz nazofarinksa ili izvukli respiratorni sekret iz dušnika. Ubacite glavu kolektora u nosnu šupljinu ili dušnik, uključite negativan pritisak, zarotirajte glavu kolektora i polako izvucite, sakupite ekstrahovanu sluz i jednom isperite kolektor sa 3 ml tečnosti za uzorkovanje (možete koristiti i pedijatrijsku). kateter spojen na špric od 50 ml Alternativni kolektor).
4. Duboki ispljuvak: Nakon što pacijent ima dubok kašalj, sakupite iskašljani sputum u epruvetu za uzorkovanje koja sadrži 3 ml tečnosti za uzorkovanje. Ako se sputum ne prikupi u tečnosti za uzorkovanje, 2 do 3 ml tečnosti za uzorkovanje se može dodati pre testa ili se može dodati jednaka zapremina probavnog soka sputuma. Formula rastvora za skladištenje digestivnog soka sputuma prikazana je u tabeli 1.
Kada koristite, razblažite rastvor za skladištenje na 50 ml sa dejonizovanom vodom, pomešajte ga sa istom zapreminom sputuma, ili pogledajte uputstva za upotrebu reagensa, ili koristite jednaku zapreminu sputuma sa 1 g/L fosfatnog pufera koji sadrži proteinazu K za konverziju ispljuvak.
5. Tečnost za ispiranje bronhija: ubacite kolektorsku glavu iz nozdrve ili trahealne šupljine u dušnik (oko 30 cm dubine), ubrizgajte 5ml normalnog fiziološkog rastvora, uključite negativni pritisak, okrenite kolektorsku glavu i polako izvucite, sakupite ekstrahovanu sluz, I jednom isperite kolektor otopinom za uzorkovanje, ili možete koristiti pedijatrijski kateter spojen na špric od 50 ml da zamijenite kolekciju.
6. Alveolarna lavažna tekućina: Nakon lokalne anestezije, fiberoptički bronhoskop ubaciti kroz usta ili nos kroz ždrijelo u bronh desnog srednjeg režnja ili jezičnog segmenta lijevog plućnog krila i ukucati njegov vrh u otvor grane bronha i polako ga dodati kroz otvor za biopsiju traheje. Bakterijski fiziološki rastvor, svaki put 30-50ml, ukupno 100-250ml, ne bi trebalo da prelazi 300ml.
7. Uzorak stolice: Uzmite 1ml rastvora za obradu uzorka, pokupite uzorak stolice veličine zrna soje i dodajte ga u epruvetu, lagano puhnite i usišite 3 do 5 puta, ostavite da stoji na sobnoj temperaturi 10 minuta, centrifugirajte na 8000 rpm tokom 5 minuta i apsorbirajte supernatant. Detekcija. Rastvor za tretman fekalnih uzoraka može se pripremiti sam, a formula je prikazana u tabeli 2.
HANK'S rastvor ili drugi izotonični rastvor soli, tečnost kulture tkiva ili rastvor fosfatnog pufera se takođe mogu koristiti za rastvaranje uzorka stolice za pripremu suspenzije stolice. Ako pacijent ima simptome dijareje, uzmite 3~5ml uzorka fekalije, nježno pipetom promiješajte, centrifugirajte na 8000 o/min 5 minuta i apsorbirajte supernatant za upotrebu.
8. Analni štapić: Upotrijebite sterilni pamučni štapić da ga nježno umetnite u anus 3～5 cm, zatim ga lagano zarotirajte, odmah ga stavite u epruvetu za uzorkovanje s vanjskim poklopcem od 15 ml koja sadrži 3～5 ml otopine za zaštitu od virusa, bacite rep, i okrenite ga. Zategnite poklopac cijevi.
9. Uzorci krvi: Preporučuje se korištenje vakuumskih epruveta za prikupljanje krvi koje sadrže EDTA antikoagulant za prikupljanje uzoraka krvi od 5 ml. Prema vrsti odabranih reagensa za ekstrakciju nukleinske kiseline, za ekstrakciju nukleinske kiseline koristite punu krv ili plazmu. Da biste odvojili plazmu, centrifugirajte punu krv na 1500-2000 o/min u trajanju od 10 minuta i sakupite supernatant u sterilnu plastičnu epruvetu sa navojem.
10. Uzorak seruma: Sakupite 5 ml uzorka krvi vakuumskom epruvetom za prikupljanje krvi pod negativnim pritiskom, ostavite na sobnoj temperaturi 30 minuta, centrifugirajte na 1500-2000 o/min 10 minuta i sakupite serum u sterilnu plastičnu epruvetu sa navojnim vrhom.
11. Površinski uzorci: Pogledajte metodu preporučenu u"Tehničke specifikacije za praćenje životne sredine novog korona virusa na poljoprivrednom (tržišnom) tržištu " (WS/T776—2021). Nakon što je bris za uzorkovanje potpuno infiltriran rastvorom za zaštitu od virusa, ponovo ga nanesite na površinu, a zatim nanesite bris. Vratite ga u epruvetu za uzorkovanje i natopite, izvadite i ponovo nanesite uzorak, ponovite više od 3 puta. Distribuirano uzorkovanje u više tačaka vrši se na objektima velikih površina.
12. Uzorci kanalizacije: Pogledajte metode preporučene u"Tehničke specifikacije za praćenje životne sredine novog koronavirusa na poljoprivrednom (tržišnom) tržištu " (WS/T776—2021). Kada uzimate uzorak kanalizacije, uronite bris u adsorbiranu kanalizaciju i uklonite bris. Vratite cijev za uzorkovanje da se natopi, izvadite je i ponovo uronite u kanalizaciju, ponovite više od 3 puta i izvršite distribuirano uzorkovanje u više tačaka za svaku lokaciju uzorkovanja otpadnih voda. Prilikom prikupljanja uzoraka otpadne vode, koristite polietilenske plastične boce za prikupljanje 1L～1,5L kanalizacije. Za sakupljanje otpadnih voda veće od 1,5L možete koristiti polietilenske plastične kante ili specijalnu opremu za obogaćivanje uzoraka vode na licu mjesta. Prije uzimanja uzoraka otpadne vode, potrebno ih je temeljito promiješati i potom uzorkovati; ako se otpadna voda teško dobro miješa i dolazi do raslojavanja, uzorkovanje se može obaviti u slojevima prema proporciji zapremine vode svakog sloja.
13. Ostali materijali: prikupiti prema zahtjevima dizajna i specifikacijama.
(5) Pakovanje uzoraka
Nakon što su uzorci sakupljeni, oni se potpakuje u biološki bezbedni kabinet drugog nivoa laboratorija za biološku bezbednost.
1. Sve uzorke treba staviti u epruvetu za prikupljanje uzoraka odgovarajuće veličine sa poklopcem na navoj i zaptivkom unutra, koja je otporna na smrzavanje, i zategnuti. Broj uzorka, tip, naziv i datum uzorkovanja navedeni su na vanjskoj strani spremnika. 2. Stavite zapečaćene uzorke u zapečaćenu vreću, svaka vreća je ograničena na jedan uzorak. Zahtjevi za pakovanje uzoraka moraju ispunjavati odgovarajuće standarde"Tehničkih pravila za bezbjedan transport opasnog tereta vazdušnim putem ". 3. Kada se radi o transportu vanjskih uzoraka, troslojno pakovanje se vrši prema vrsti uzoraka i infektivnim tvarima klase A ili klase B.
(6) Očuvanje uzoraka
Uzorke koji se koriste za izolaciju virusa i detekciju nukleinske kiseline treba testirati što je prije moguće. Uzorci koji se mogu testirati u roku od 24 sata mogu se čuvati na 4°C; uzorke koji se ne mogu otkriti u roku od 24 sata treba čuvati na -70°C ili niže (ako nisu - Čuvati na 70°C u frižideru na -20°C). Uzorci seruma mogu se čuvati na 4°C 3 dana, a mogu se čuvati duže vrijeme ispod -20°C. Treba postaviti posebne biblioteke ili posebne šaltere za odvojeno pohranjivanje uzoraka.
(7) Uzorke dostaviti na uvid
Uzorke treba poslati u laboratoriju što je prije moguće nakon uzimanja, a uzorke ne treba stavljati na sobnu temperaturu (25°C) duže od 4 sata nakon uzimanja. Ako je potreban transport na velike udaljenosti, preporučuje se korištenje suhog leda i drugih metoda hlađenja za skladištenje. Izbjegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje tokom transporta uzoraka.
1. Pošaljite uzorke
Svi prvobitni ili rani slučajevi u lokalnim epidemijama otkriveni u različitim pokrajinama (autonomne regije i opštine), ključni slučajevi vezani za epidemiologiju ranih slučajeva, lokalni slučajevi sa nepoznatim izvorima infekcije, uvezeni slučajevi iz inostranstva, uvezena roba i srodna ekološka pozitivni uzorci, itd. Najmanje 2 uzorka treba prikupiti paralelno, jedan se šalje svakoj pokrajinskoj agenciji za kontrolu bolesti na testiranje, drugi se šalje u Kineski centar za kontrolu i prevenciju bolesti na testiranje i pregled, a obrazac za podnošenje uzorka je u prilogu (vidi Dodatak 10-1). Novi reprezentativni sojevi izolovani iz različitih provincija trebali bi se odmah poslati u Kineske centre za kontrolu i prevenciju bolesti na pregled i čuvanje.
2. Transport uzoraka i sojeva
(1) Domaći prijevoz novih sojeva koronavirusa ili drugih potencijalno zaraznih bioloških materijala klasificira se kao klasa A, a odgovarajući UN broj je UN2814. Ambalaža je u skladu sa PI620 klasifikacijom ICAO dokumenta Doc9284"Tehnička uputstva za bezbedan transport opasnog tereta vazdušnim putem" Zahtjevi za pakovanje: Uzorci okoliša pripadaju kategoriji B, a odgovarajući UN broj je UN3373. Ambalaža ispunjava zahtjeve klasifikacije PI650 ICAO dokumenta Doc9284"Tehnička pravila za bezbjedan transport opasnih materija u vazduhu"; gore navedena standardna ambalaža može se koristiti za transport drugim transportnim sredstvima. Prijevoz novih sojeva koronavirusa ili drugih potencijalno zaraznih materijala trebao bi se obavljati u skladu sa"Administrativnim propisima o prijevozu visokopatogenih mikroorganizama (virusa) vrsta ili uzoraka koji mogu zaraziti ljude " (ranije Naredba Ministarstva zdravlja br. 45) za"Uvjerenje o dozvoli za prijevoz" .
(2) Međunarodni transport Uzorci ili sojevi novog korona virusa koji se prevoze u međunarodnom prometu moraju biti upakovani na standardizovan način, proći odgovarajuće procedure u skladu sa"Pravilnikom o sanitarnom i karantenskom ulasku i Izađite iz posebnih članaka" i ispunite relevantne nacionalne i međunarodne zahtjeve.
(3) Prijem i upravljanje uzorcima i sojevima virusa. Uzorci prevezeni avionom stižu na odredišni aerodrom i profesionalnim transportnim vozilima se transportuju do prijemne jedinice. Uzorci koji se prevoze kopnom prevoze se profesionalnim vozilima. Prevoznici i primaoci će se baviti uzorcima Dvostruki znak za prijem. Uzorcima i sojevima novog koronavirusa treba upravljati posvećena osoba, tačno evidentirati izvor, vrstu, količinu i registraciju broja uzoraka i sojeva, poduzeti efikasne mjere kako bi se osigurala sigurnost sojeva i uzoraka i strogo spriječiti zloupotreba, zlonamjerna upotreba, krađa i krađa. Pljačka, gubitak, curenje i drugi incidenti.
02
Laboratorijsko testiranje na novi korona virus
