Načini da izbjegnete kontaminaciju ćelija: savjeti za pipetiranje koje trebate znati
Među mnogim varijablama koje se kontroliraju u ćelijskoj kulturi, jedna specifična varijabla utječe na cijeli eksperiment: kontaminacija. Jedan faktor koji doprinosi ćelijskoj kontaminaciji nije uvijek na radaru, i iako može tiho utjecati na zdravlje stanica i utjecati na podatke mjerenja, to je kontaminacija pipetiranjem.
Izbor pipeta, vrhova za pipete i programa za pipetiranje pridaje malo pažnje prilikom dizajniranja eksperimenata. Čak i univerzalni rastvor (autoklaviranje) za izbegavanje kontaminacije pipetiranjem možda neće biti tako efikasan kao što se obično veruje.
Prvo pravilo ćelijske kulture: izbjegavajte kontaminaciju. Zašto je sterilna tehnika toliko važna za uspješnu kulturu ćelija?
Aseptička tehnika je jedini način da se dobiju pouzdani i ponovljivi rezultati. Zagađenje može uticati na rast ćelija, metabolizam i zdravlje -- nešto što naučnici zanimaju da proučavaju. Kontaminirane ćelijske linije nemaju željena svojstva i svaki put funkcionišu drugačije, ovisno o težini kontaminacije. Takođe, ako zagađivači prerastu u ćelije koje vas zanimaju, možete završiti proučavanjem pogrešnog organizma.
Sa kojim vrstama zagađivača se naučnici često susreću?
Uobičajeni izvori kontaminacije su bakterije, kvasac i plijesan. U radu na kulturi ćelija, najteže je otkriti i iskorijeniti mikoplazmu. Manje uobičajene vrste kontaminacije uključuju, na primjer, plastične materijale koji se izlužuju u laboratorijskom potrošnom materijalu.
Koji su uobičajeni uzroci kontaminacije ćelija?
Uobičajeni izvor kontaminacije je loše pipetiranje, kao što je korištenje kontaminiranih pipeta i vrhova bez filtera. Osim toga, problem je i nedostatak dobre laboratorijske prakse, kao što je neadekvatna dekontaminacija instrumenata kao što su inkubatori ili kabineti za laminarni protok. Za uklanjanje mikoplazme potrebna je filtracija pomoću filtera 0.1 µm umjesto filtera 0.2 µm.
Tri kontaminacije pipetiranjem:
1. Kontaminacija od pipete do uzorka: Pipeta ili vrh pipete kontaminiraju uzorak.
Kako izbjeći:
Koristite sterilne vrhove filtera kako biste spriječili kontaminaciju tijela pipete.
Zamijenite vrh pipete nakon svakog uzorka.
Autoklavirajte ili sterilizirajte pipete redovno etanolom. Odaberite pipetu kompatibilnu sa autoklavom.
2. Kontaminacija od uzorka do pipete: Pipetiranje uzorka u tijelo pipete kontaminira pipetu.
Kako izbjeći:
Koristite vrhove filtera ili vrhove sa pozitivnim pomakom kako biste spriječili da uzorci uđu u tijelo pipete.
Prilikom pipetiranja držite pipetu u okomitom položaju. Čuvajte pipetu uspravno.
Nagnite bocu prilikom pipetiranja.
Polako otpustite dugme kako biste izbegli prskanje uzorka u pipetu. Odaberite pipetu opremljenu funkcijom mekog izbacivanja.
3. Kontaminacija među uzorcima: Preostali uzorci pipetiranjem se prenose u sljedeći uzorak. Obično se javlja kada se isti vrh koristi više puta.
Kako izbjeći:
Zamijenite vrh pipete nakon svakog uzorka.
Koristite vrhove filtera ili vrhove sa pozitivnim pomakom kako biste spriječili da uzorak uđe u tijelo pipete i pređe na sljedeći uzorak.
Uvjerite se da je vrh pipete zapečaćen na pipeti kako biste izbjegli curenje uzorka. Na primjer, savjet Yongyue Medical.
Postoje li faktori kontaminacije kojih naučnici možda nisu ni svjesni?
Efikasnost autoklaviranja često nije provjerena, a ako autoklav ne radi ispravno, vrhovi autoklaviranih pipeta možda neće biti sterilni. Prethodno sterilisani filteri umotani u zaštitnu ambalažu su najsigurnija opcija za sprečavanje ovakvih nezgoda. Proces predsterilizacije za visokokvalitetne vrhove pipeta se redovno provjerava kako bi se osigurala efikasnost predsterilizacije.
Kako alati za pipetiranje i doziranje olakšavaju naučnicima rukovanje uzorcima u sterilnom okruženju?
Odabir pravih pipeta i vrhova za pipete može olakšati aseptični radni tok. Yongyue medicinske pipete se lako čiste i otvaraju bez alata, što ubrzava svakodnevno čišćenje. Budući da je autoklaviranje efikasnije u uklanjanju kontaminacije od etanolnih maramica, Sartorius mehaničke pipete su potpuno autoklavirane, što znači da možete pouzdano dekontaminirati svoje pipete. Mekano izbacivanje vrha sprečava potencijalni rizik od kontaminacije od prskanja kada se vrh izbaci. Prethodno sterilizirani vrhovi filtera štite vaše uzorke od unakrsne kontaminacije. Yongyue medicinski vrhovi su također upakovani u nepropusno pakovanje, što znači da bilo kakva kontaminacija pod uslovima skladištenja i isporuke neće doći u kontakt sa vrhovima ili kutijom za vrhove.
Kako naučnici mogu izbjeći zagađenje? Koji su vaši najbolji savjeti za sterilni rad?
Prvo, dobra laboratorijska praksa i pažljivo planiranje radnih koraka. Pobrinite se da držite samo ono što je potrebno za određeni tok rada u kabinetu za laminarni protok i koristite jednu ćelijsku kulturu u isto vrijeme. Osim toga, redovno testiranje na kontaminante poput mikoplazme daje vam mir i povjerenje u rezultate. Kada radite u sterilnim uslovima, novac potrošen na prethodno sterilisane vrhove filtera i sterilne reagense vredi novca.
