Često postoje problemi ove ili one vrste u procesu ćelijske kulture. Nemojte podcijeniti ćelijsku kulturu, ali ona sadrži univerzitetska pitanja. Komunikacijom s korisnicima naći ćete mnoge probleme koji se mogu izbjeći. Sljedeće su uobičajene u procesu ćelijske kulture. Analizirajte uzrok abnormalnosti.
petrijeva posuda
1. Kultivisane ćelije se ne lijepe za zid
mogući razlog
1. Pretjerana probava tripsina;
2. Kontaminacija mikoplazmom;
3. pH vrijednost medijuma je previše alkalna (razgradnja NaHCO3);
4. Starenje ćelija;
5. Početna koncentracija inokuliranih ćelija je preniska ili previsoka.
Rješenje
1. Skratiti vrijeme varenja tripsina ili smanjiti koncentraciju tripsina;
2. Izolirajte kulturu i otkrijte mikoplazmu. Očistite postolje ili inkubator. Ako se pronađe kontaminacija mikoplazmom, bacite kulturu;
3. Koristite sterilni rastvor sirćetne kiseline da podesite pH ili napunite sterilnim CO2;
4. Omogućiti nove konzervacijske ćelije;
5. Podesite optimalnu koncentraciju inokuliranih ćelija.
2. Grupisanje ćelija suspenzije
mogući razlog
1. Podloga za kulturu sadrži jone kalcijuma i magnezijuma;
2. Kontaminacija mikoplazmom;
3. Prekomjerna probava proteazom uzrokuje lizu stanica;
4. Kontaminacija DNK.
Rješenje
1. Operite ćelije uravnoteženom otopinom soli bez kalcija i magnezija, nježno duvajte i sišite
2. Ćelije dobijaju jednu ćelijsku suspenziju;
3. Odvojite kulturu i otkrijte mikoplazmu;
4. DNasel tretman ćelija.
3. Kultivisane ćelije rastu sporo
mogući razlog
1. Zbog zamjene drugog medija za kulturu ili seruma;
2. Neke komponente neophodne za rast ćelija u medijumu kulture, kao što su glutamin ili faktori rasta, su iscrpljene ili nedostaju ili su uništene;
3. Postoji mala količina bakterijske ili gljivične kontaminacije u kulturi;
4. Nepravilno skladištenje reagensa;
5. Početna koncentracija inokuliranih ćelija je preniska;
6. Ćelije su ostarile;
7. Kontaminacija mikoplazmom.
Rješenje
1. Uporedite sastav novog medijuma i originalnog medijuma, uporedite novi serum i stari serum kako biste podržali eksperimente rasta ćelija i pustite ćelije da se postepeno prilagode novom medijumu;
2. Prebaciti u svježe pripremljenu podlogu za kulturu, ili dodati glutamin i faktore rasta;
3. Koristite podlogu za kulturu bez antibiotika, ako se utvrdi da je kontaminirana, bacite kulturu;
4. Serum treba čuvati na -10 do -20 stepeni. Podlogu za kulturu treba čuvati na 2-8 stepeni u mraku. Kompletnu podlogu za kulturu koja sadrži serum treba čuvati na 2-8 stepenu i potrošiti u roku od 1 sedmice;
5. Povećati početnu koncentraciju inokuliranih ćelija;
6. Promjena u novu konzervacijsku ćeliju;
7. Izolirajte kulturu i otkrijte mikoplazmu. Očistite postolje i inkubator. Ako se pronađe kontaminacija mikoplazmom, bacite kulturu.
Četvrto, kultivisane ćelije slabo rastu
mogući razlog
A. Stanje same ćelije
1. Broj ćelijskih prolaza je veliki, a ćelije stare;
2. Količina inokulacije ćelije: preniska količina inokulacije, spor rast ćelija;
3. Prolaz ćelija je prekasno: trovanje ćelija, koje utiče na rast ćelija nakon prolaska;
4. Vrijeme varenja tripsina je predugo ili prekratko: ako je vrijeme predugo, ćelije umiru; ako je vrijeme prekratko, ćelije se ne razdvajaju u potpunosti u klastere i ćelije umiru;
5. Krioprezervacija i oporavak ćelija: sporo zamrzavanje i trenutna liza.
B. Zagađenje
1. Kontaminacija mikoplazmom;
2. Kontaminacija plijesni.
C, podloga za kulturu ili serum
1. Nema validacije prije zamjene seruma ili medija;
2. Da li je odabrani medij prikladan;
3. Da li je priprema medijuma odgovarajuća;
4. Da li je priprema medija tačna.
D. negovati životnu sredinu
1. Da li je isporuka CO2 normalna?
2. Temperatura inkubatora ili šejkera je pravilno kontrolisana.
Rješenje
Prema gore navedena četiri moguća razloga, donijeti ciljana rješenja
1. Obratite pažnju na stanje ćelija: kao što je broj prolaza, količina inokulacije, itd.;
2. Izbjegavajte zagađenje (koristite običan, legalan i sljedivi serum);
3. Koristite odgovarajući serum ili medijum, po mogućnosti proveren;
4. Obratite pažnju na laboratorijsko okruženje.
Mogući uzroci ćelijske smrti u kulturi
1. U inkubatoru nema CO2;
2. Temperatura u inkubatoru previše varira;
3. Ćelije su oštećene tokom krioprezervacije ili oporavka;
4. Osmotski pritisak medijuma kulture je netačan;
5. Akumulacija toksičnih metabolita u mediju kulture.
Rješenje
1. Detekcija CO2 u inkubatoru;
2. Provjerite temperaturu u inkubatoru;
3. Uzmite novu očuvanu ćelijsku vrstu;
4. Detektirati osmotski pritisak medijuma kulture;
5. Promijeniti u svježi medij;