Kako se kaže, ako radnik želi da radi dobro, prvo mora da naoštri svoj alat. Izbor potrošnog materijala je veoma važan za dobijanje zadovoljavajućih rezultata PCR eksperimenta. Kada analiziramo PCR rezultate, često se fokusiramo na analizu prajmera, koncentracije enzima, temperature i vremena, ali zanemarujemo da su potrošni materijali za PCR također jedan od faktora koji utiču. Postoji mnogo vrsta PCR potrošnog materijala, kako odabrati pravi PCR potrošni materijal? Evo nekoliko pitanja koja će vam pomoći da pronađete odgovor.
pcr potrošni materijal
1. Zašto se potrošni materijal za PCR općenito pravi od PP?
Bilo da se radi o običnom PCR-u ili kvantitativnom PCR-u fluorescencije u realnom vremenu (qPCR), obično će njegovi potrošni materijali biti u direktnom kontaktu s reagensima ili uzorcima, tako da su visokokvalitetni materijali i dobre tehnike obrade potrebni u procesu proizvodnje i pripreme. Opšti potrošni materijal je izrađen od polipropilena (PP). Polipropilen (PP) je biološki inertan materijal, površina nije laka za prianjanje na biomolekule i ima dobru hemijsku otpornost i temperaturnu toleranciju.
2. Kako odabrati PCR epruvete/ploče različitih zapremina?
Uobičajene količine za PCR epruvete/ploče:
• Jedna cijev/{{0}}cijev/12-cijev: 0.5mL, 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}ploča sa jažicom: 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}ploča sa bunarima: 0,02mL
Specifikacije za PCR epruvete/ploče:
Odaberite odgovarajući proizvod prema specifičnim eksperimentalnim zahtjevima. Volumen većine PCR epruveta može zadovoljiti zahtjeve PCR reakcija. Specifikacije kapaciteta su dostupne u standardnom kapacitetu i malom kapacitetu. Općenito, preporučuje se prvo odabrati cijevi niskog kapaciteta. Budući da cijevi/ploče reaktora male zapremine imaju manje prostora za glavu, prijenos topline je poboljšan, a isparavanje je smanjeno. Istovremeno, potrebno je izbjegavati dodavanje previše ili premalo uzorka prilikom dodavanja uzoraka. Previše može dovesti do smanjene toplinske provodljivosti, prosipanja i unakrsne kontaminacije, dok premalo može uzrokovati gubitak uzorka isparavanjem.
3. Koja je razlika između ravnog poklopca/konveksnog poklopca jednostruke cijevi ili 8- cijevi u nizu?
Kada je zapremina uzorka mala, preferiraju se jednostruke ili {{0}}epruvete. Međutim, kada je zahtjev za volumenom reakcije velik, prevladavaju pojedinačne epruvete, a volumen može doseći 0,5 mL. Postoje dvije vrste jednostruke i 8-cijevne cijevi sa ravnim poklopcem i konveksnim poklopcem, svaka ima svoje prednosti. Ravni poklopac pruža preciznu isporuku fluorescentnog signala za qPCR; lako se piše na markerima. Konveksni poklopac je u kontaktu sa poklopcem PCR instrumenta kako bi se smanjila deformacija cijevi uzrokovana pritiskom; međutim, to će utjecati na prijenos fluorescentnih signala i ne može se primijeniti na qPCR eksperimente.
4. Koje su razlike u scenarijima upotrebe različitih 96-ploča?
96-ploče sa bunarima se općenito dijele na ploče bez obruba, ploče s polu-obloženom i ploče s punim rubom.
Ploče bez suknje: Kompatibilne sa većinom termociklera ili qPCR mašina, ali nisu pogodne za automatizovane aplikacije. Stabilnost nije visoka tokom procesa pipetiranja i potrebno ga je koristiti sa držačem ploče.
Ploča polusuknje: Može se prilagoditi za označavanje ili nanošenje bar koda, kao i automatsku primjenu, i ima dobru stabilnost pipetiranja.
Puna zaštitna ploča: vrlo pogodna za automatizirane laboratorijske aplikacije, ali također pogodna za aplikacije naljepnica i bar kodova. Dobra mehanička čvrstoća, pogodna za PCR mašine sa izbočenim modulima i visoka stabilnost tokom pipetiranja.
5. Da li je materijal PCR ploče/epruvete deblji i stabilniji?
br. Potrošni materijal za PCR mora imati ujednačenu debljinu stijenke kako bi se osigurao dosljedan prijenos topline. Ultra-tanka stijenka cijevi je 50 posto tanja od standardne verzije, što može dodatno smanjiti termičku barijeru, što rezultira bržim i boljim odzivom.
6. Zašto zarezani uglovi i oznake nisu isti?
Rezanje ugla: Odabir položaja ugla rezanja PCR ploče ovisi o zahtjevima prilagođenog instrumenta za lako pozicioniranje.
Identifikacija: Alfanumeričke oznake na PCR pločama pomažu u identifikaciji pojedinačnih bunara i lokacija uzorka. Općenito, to je logotip sa podignutim brojem u boji ili ugravirani logo. Za neke automatizirane eksperimente primjene, reakcijska ploča s utisnutim oznakama će biti bolje zapečaćena.
7. Neki bunari za PCR ploče su izbočeni, dok su drugi ravni. Koji je bolji?
Ono što je prikladno je dobro. Uobičajene PCR ploče imaju dva tipa: ravne ivice bunara i podignute ivice bunara. Reakciona ploča sa ravnim rubom bunara, pogodna za većinu termociklera. Reakciona ploča na rubu otvora za uspon je pogodna za zaptivanje, što može smanjiti rizik od unakrsne kontaminacije između uzoraka.
8. Kako odabrati PCR epruvete/ploče različitih boja?
Za obične PCR reakcije mogu se koristiti transparentne. U PCR reakciji u realnom vremenu, osjetljivost i konzistencija bijele epruvete su relativno veće. Bijeli zidovi cijevi sprječavaju prolazak fluorescencije kroz zidove cijevi i prelamanje, čime sprječavaju da fluorescencija prođe do grijaćeg modula, da je modul apsorbuje ili da se reflektuje nekonzistentno. U poređenju sa prozirnim cevima, jači i fokusiraniji fluorescentni signali mogu se prikupiti na vrhu belih cevi.
